微生物培养基的配制步骤
第一步溶化：一般应放在玻璃器皿内，加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分。在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10-15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。
第二步校正酸碱度(调节pH)：培养基必须有适当的pH，因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢溶夜或10%碳酸钠溶夜、1mol/l盐酸溶夜。当调节缓冲夜的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l溶夜，灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适，因此对培养基、缓冲夜、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲夜、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节，干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证，测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱夜加以校正，调整pH后要加热过滤，使培养基澄清。
第三步培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min，但容器和装量较大时，应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80-100℃、30min，连续3d，间歇灭菌，血清或组织夜，采用低热56—58℃水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌，高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物，以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。
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